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Northern 和 Southern Blotting,以及 Colony 和 Plaque Lifts

更新時(shí)間:2012-03-19      點(diǎn)擊次數(shù):8212

Immobilon-Ny+ 帶正電尼龍轉(zhuǎn)印膜和Immobilon-NC 轉(zhuǎn)印膜

Millipore 提供了一種用于核酸應(yīng)用轉(zhuǎn)印膜選擇。 使用帶正電的 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜可以在 Southern blotting,Northern blotting 和 colony/plaque lifts 實(shí)驗(yàn)中獲得出色的結(jié)果。 Immobilon-NC 轉(zhuǎn)印膜,是主要的 Southern 和 colony/plaque 實(shí)驗(yàn)方案中zui初使用的膜,也可作為一種靈敏度較低但更經(jīng)濟(jì)的選擇。

Immobilon-Ny+ 帶正電尼龍轉(zhuǎn)印膜

Immobilon-Ny+ 是一種帶正電的尼龍轉(zhuǎn)印膜,非常適合于可靠與可重現(xiàn)的轉(zhuǎn)移、固定、雜交及隨后的重復(fù)雜交實(shí)驗(yàn)。 其表面均一分布的正電荷密度確保得到zui高的靈敏度和zui低的背景信號(hào)。 此膜經(jīng)強(qiáng)化處理具有超長(zhǎng)的耐久性,這一點(diǎn)對(duì)于重復(fù)雜交試驗(yàn)至關(guān)重要。

可提供詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,在使用 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜時(shí)可用于優(yōu)化轉(zhuǎn)印結(jié)果。


 

  • 靈敏度zui高,而背景信號(hào)zui小
     
  • 非常出色的重復(fù)雜交特性
     
  • 在化學(xué)發(fā)光法和放射性檢測(cè)系統(tǒng)中均表現(xiàn)出色

 

性能

Southern Blotting

直接比較三種帶正電尼龍膜在各自優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方案下的表現(xiàn):每種膜在其推薦的紫外波長(zhǎng)照射下交聯(lián)。 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜的雜交信號(hào)是其它兩種膜的 2 倍。

直接比較三種帶正電尼龍膜在各自優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方案下的表現(xiàn):每種膜在其推薦的紫外波長(zhǎng)照射下交聯(lián)。 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜的雜交信號(hào)是其它兩種膜的 2 倍。

12 次重復(fù)雜交之后的信號(hào)強(qiáng)度

尼龍膜在254 nm 交聯(lián),并進(jìn)行了多次重復(fù)雜交,依次為:用 <sup>32</sup>P 標(biāo)記探針做 2 次雜交,4 次模擬雜交,用<sup>32</sup>P 標(biāo)記探針做第 7 次雜交,然后進(jìn)行 5 次模擬雜交以及用 <sup>32</sup>P 標(biāo)記探針做第 13 次雜交。 在每個(gè)雜交周期之間,將膜置于 0.4M NaOH 溶液中,在 45°C 下洗提 30 分鐘。 模擬雜交與真實(shí)雜交*一樣,區(qū)別在于未加 <sup>32</sup>P 標(biāo)記探針。 在整個(gè)重復(fù)雜交過(guò)程中,Immobilon-Ny+ 的信號(hào)強(qiáng)度是競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品 A 和 B 的兩倍。

尼龍膜在 254 nm 交聯(lián),并進(jìn)行了多次重復(fù)雜交,依次為:用 32P 標(biāo)記探針做 2 次雜交,4 次模擬雜交,用 32P 標(biāo)記探針做第 7 次雜交,然后進(jìn)行 5 次模擬雜交以及用 32P 標(biāo)記探針做第 13 次雜交。 在每個(gè)雜交周期之間,將膜置于 0.4M NaOH 溶液中,在 45°C 下洗提 30 分鐘。 模擬雜交與真實(shí)雜交*一樣,區(qū)別在于未加 32P 標(biāo)記探針。 在整個(gè)重復(fù)雜交過(guò)程中,Immobilon-Ny+ 的信號(hào)強(qiáng)度是競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品 A 和 B 的兩倍。

檢測(cè)靈敏度

將凝膠上 DNA 的量減少到 0.01 ng。 0.1 lane(條帶)中的 2.2 和 2.0 kbp 帶分別與 DNA 的 0.48 和0.42 pg 相對(duì)應(yīng)。 大約相當(dāng)于 10 µg 人類基因組 DNA 中一個(gè)單拷貝基因序列。 可通過(guò)對(duì)探針濃度加倍來(lái)提高靈敏度。 在0.01 ng 條帶中,與競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品 A 相比,Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜靈敏度稍高,而背景信號(hào)更低。

將凝膠上 DNA 的量減少到 0.01 ng。 0.1 lane(條帶)中的 2.2 和 2.0 kbp 帶分別與 DNA 的 0.48 和 0.42 pg 相對(duì)應(yīng)。 大約相當(dāng)于 10 µg 人類基因組 DNA 中一個(gè)單拷貝基因序列。 可通過(guò)對(duì)探針濃度加倍來(lái)提高靈敏度。 在 0.01 ng 條帶中,與競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品 A 相比,Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜靈敏度稍高,而背景信號(hào)更低。

用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)進(jìn)行 Northern Blotting

鼠肝的全部 RNA(1 µg) 在甲醛瓊脂糖凝膠中電泳分離,然后通過(guò)毛細(xì)作用轉(zhuǎn)印到 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜和競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品帶正電尼龍膜 “A”。 與烘焙相比,通過(guò)紫外交聯(lián)固定RNA 能增強(qiáng)信號(hào)。 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜比競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品 A 表現(xiàn)出更高的靈敏度。

鼠肝的全部 RNA (1 µg) 在甲醛瓊脂糖凝膠中電泳分離,然后通過(guò)毛細(xì)作用轉(zhuǎn)印到 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜和競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品帶正電尼龍膜 “A”。 與烘焙相比,通過(guò)紫外交聯(lián)固定RNA 能增強(qiáng)信號(hào)。 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜比競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品 A 表現(xiàn)出更高的靈敏度。

Colony Lifts

將載有 pUC19或 pLH2(2.0 kbp λ 噬菌體 DNA Hind III 片段克隆至 pUC19)的 JM109 混合細(xì)菌懸浮液置于瓊脂培養(yǎng)皿中,在 37°C 下培養(yǎng)過(guò)夜。 將培養(yǎng)皿在 4°C 下冷卻30 分鐘,將菌落(直徑大約 1–2 mm)轉(zhuǎn)印至一片 82 mm 直徑的Immobilon-Ny+ 圓片膜上,或轉(zhuǎn)印至競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品帶正電的尼龍膜上。 膜上的 DNA 在254 nm, 60,000 µJoules/cm<sup>2</sup> 紫外光照射下 交聯(lián)。 然后用 a <sup>32</sup>P 標(biāo)記的 DNA 探針對(duì)膜進(jìn)行雜交,并使用磷屏成像系統(tǒng)顯色。

將載有 pUC19 或 pLH2(2.0 kbp λ 噬菌體 DNA Hind III 片段克隆至 pUC19)的 JM109 混合細(xì)菌懸浮液置于瓊脂培養(yǎng)皿中,在 37°C 下培養(yǎng)過(guò)夜。 將培養(yǎng)皿在 4°C 下冷卻30 分鐘,將菌落(直徑大約 1– 2 mm)轉(zhuǎn)印至一片 82 mm 直徑的 Immobilon-Ny+ 圓片膜上,或轉(zhuǎn)印至競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品帶正電的尼龍膜上。 膜上的 DNA 在 254 nm, 60,000 µJoules/cm2 紫外光照射下 交聯(lián)。 然后用 a 32P 標(biāo)記的 DNA 探針對(duì)膜進(jìn)行雜交,并使用磷屏成像系統(tǒng)顯色。

Immobilon-NC 轉(zhuǎn)印膜

Immobilon-NC 轉(zhuǎn)印膜是一種經(jīng)濟(jì)型選擇,用于核酸和蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)方案。 這種轉(zhuǎn)印膜是 Southern、colony/plaque 以及蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)方案中zui初使用的膜。 NC HATF 所含的混合纖維素酯基質(zhì),不含在細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)干擾細(xì)胞壁完整性的表面活性劑。 這些膜用于 colony lifts。 NC HAHY 所含的混合纖維素酯基質(zhì),所帶的表面活性劑能夠增強(qiáng)可濕性以及轉(zhuǎn)印過(guò)程中的處理能力。 兩種膜對(duì)核酸和蛋白質(zhì)都具有高吸附容量。 適用于常規(guī)轉(zhuǎn)印。

訂購(gòu)信息:

Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜 – 圓片濾膜
 

比較 目錄編號(hào) 濾膜直徑,mm 數(shù)量/包裝  
  INYC08250 82 50
 
  INYC08550 85 50
 
  INYC13250 132 50
 
  INYC13750 137 50
 

Immobilon-NC 不含表面活性劑的轉(zhuǎn)印膜 – 圓片濾膜
 

比較 目錄編號(hào) 濾膜直徑,mm 數(shù)量/包裝  
  HATF08250 82 50
 
  HATF08550 85 50
 
  HATF13250 132 50
 
  HATF13750 137 50
 

Immobilon-NC 轉(zhuǎn)印膜 – 圓片濾膜
 

  目錄編號(hào) 濾膜直徑,mm 數(shù)量/包裝  
  HAHY08250 82 50
 
  HAHY08550 85 50
 
  HAHY13750 137 50
 

Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜 – 片和卷
 

比較 目錄編號(hào) 濾膜尺寸,cm x cm 數(shù)量/包裝  
  INYC61150 6 x 11 50
 
  INYC09120 9 x 12 10
 
  INYC10100 10 x 10 10
 
  INYC15150 15 x 15 10
 
  INYC20200 20 x 20 10
 
  INYC22220 22.2 x 22.2 10
 
  INYC2222C 22.2 x 22.2 100
 
  INYC26260 26 x 26 10
 
  INYC00010 30 x 330 1
 

Immobilon-NC 轉(zhuǎn)印膜 – 片和卷
 

比較 目錄編號(hào) 濾膜尺寸,cm x cm 數(shù)量/包裝  
  HAHY304F0 30 x 30 10
 
  HATF00010 33 x 300 1
 

上海根生生物科技有限公司
地址:上海市奉賢區(qū)南橋鎮(zhèn)南橋路377號(hào)1幢
郵箱:genshengtech@163.com
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